## 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取过程

### 1. 实验材料准备

本实验选用2周龄或体重约200克的SD大鼠作为研究对象。需准备的灭菌器械包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪以及磁珠等。同时，还需要5mL注射器、0.22μm过滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠。此外，75%乙醇用于消毒，预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶也是必不可少的。对于培养基，我们选择SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。

### 2. 实验操作

在超净工作台内，首先将所需物品进行紫外消毒30分钟。接着，配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并进行过滤除菌。将大鼠在颈部实施脱颈致死后，放入75%酒精中浸泡2-3分钟，再将其固定于泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟区的皮肤，暴露脂肪组织。在剪取脂肪组织时，需谨慎避免损伤血管，然后将其放入PBS中进行清洗，剔除多余的血管和淋巴结。接下来，将脂肪组织剪成约2mm×2mm的小块，加入胶原酶，设置在37℃下进行消化，每隔5分钟对其进行震荡或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中，经过离心后，弃去上层脂滴泡沫和上清液，用培养基重悬沉淀液。随后，将细胞悬液过滤，再次离心后弃去上清，最后用培养基重悬并接种到培养瓶中。培养瓶应置于37℃、5% CO2的培养箱中以进行培养。

### 3. 注意事项

在整个实验过程中，务必保持无菌操作，以防止细胞污染。而在脂肪组织的剪取和清洗过程中，应异常细致，以免损伤细胞或引入杂质。同时，消化过程需要严格控制时间和温度，以避免过度消化造成的细胞损伤。在进行离心和过滤操作时，也需轻柔处理，确保细胞的完整性和存活率。

通过以上步骤，您将可以成功提取大鼠的脂肪间充质干细胞，为后续的生物医学研究奠定基础。在这个领域，尊龙凯时人生就博始终致力于为科研提供高质量的实验材料与服务，助力您的研究更进一步。