**产品名称**

通用名：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

**包装规格**

本产品提供多种包装规格：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒。

**预期用途**

猪瘟是一种由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引起的高度传染性、出血性和致命性疾病。其特征包括高热、微血管壁变性引起的广泛出血、坏死及梗塞等。本试剂可用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，并对猪瘟病毒疫苗免疫效果进行评估。

**原理**

本试剂盒包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，应用酶联免疫法（ELISA）检测猪血清和血浆样本中的猪瘟病毒抗体。在实验过程中，加入对照血清和待检测样本，若存在猪瘟病毒抗体，将与酶标板上的抗原结合，随后通过加入酶标记物形成特异性结合。最后，通过加底物液和终止液反应生成颜色变化，以此判断样品中是否含有猪瘟病毒抗体。

**储存及有效期**

试剂应于2-8℃保存，保质期为12个月。开封后的包被板需避光冷藏，避免潮湿，使用期限为2个月。

**适用仪器**

需使用450nm及630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备，以及可调的微量移液器。

**样品准备**

1. 依据常规方法从动物全血制备清亮、无溶血、无污染的血清样品，样品在1周内可存放于2-8℃，长期保存则需置于-20℃。

2. 使用样品稀释液对待测血清进行40倍的稀释（例如：将5μl血清加入195μl样品稀释液中混匀），阴阳性对照不需稀释。

3. 浓缩洗涤液使用前须恢复至室温并用蒸馏水稀释至20倍作为工作洗涤液（即19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液）。

**检验方法**

1. 使用前将试剂盒置于室温30分钟，使其恢复至室温。

2. 取所需的酶标板条，设置阴性和阳性对照各2孔，未用的板条应迅速密封并存放于2-8℃。

3. 向阴、阳性对照孔分别加入100μl的对照液；在样品孔中每孔加入100μl稀释后的样品。

4. 混匀后，盖好盖板膜，放置于37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5. 甩去孔内液体后，每孔加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。

6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，置于37℃避光反应30分钟。

7. 进行洗涤，同步骤5。

8. 向每孔依次添加底物液A和底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置于37℃避光反应10分钟。

9. 每孔添加终止液50μl，混匀后，于450nm（630nm作参考波长）测定各孔的吸光值。

**参考值**

正常实验条件下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≤0.3，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≥0.6。

**检验结果的判定**

1. 样品的OD值即为ODS；

2. 计算阈值：SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC)；若SP值≥0.2，结果为阳性；若SP值<0.2，结果为阴性。

3. 若实验结果为阴性，说明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

**试验方法的局限性**

该试验仅适用于定性检测猪血清、血浆中的猪瘟病毒抗体，依据SP值的高低可对抗体水平进行粗略评估。

**注意事项**

1. 操作时请佩戴手套、穿工作衣，并严格遵循消毒与隔离制度，所有实验废弃物应按传染物处理。

2. 注意终止液的腐蚀性，避免与皮肤或衣物接触，若不慎接触，请立即用大量自来水冲洗。

3. 酶标板需在恢复至室温后才可开封，未用完的酶标板应放入干燥剂的密封袋中保存。

4. 浓缩洗涤液在低温下容易结晶，使用前需回复至室温以确保溶解完全。

5. 洗涤时确保各孔加满液体，避免游离酶无法清洗干净。

6. 用于检测的样品应保持新鲜。

7. 实验结果的判定应以酶标仪读数为依据。

8. 不同批号的试剂组件不得混用。

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